Aula Prática-
Microscopia Óptica
-Noções
básicas do funcionamento do microscópio óptico
-Compreender
os componentes do microscópio
-Aprender
técnicas básicas de montagem de lâmina
-Preparar
uma lâmina histológica de pele de cebola
Microscópio óptico
Definição:
O microscópio óptico (M.O.) é um instrumento que permite observar objetos de
pequenas dimensões ou invisíveis a olho nu, uma vez que fornece imagens
aumentadas devido ao uso de lentes e através do uso de ondas de luz visíveis
que iluminam a amostra.
A
principal proposta do microscópio é a magnificação (aparente aumento em
tamanho) de espécimes. O microscópio também fornece resolução (habilidade de
distinguir dois objetos posicionados em alta proximidade). Ou seja, a resolução
é a distância mínima pela qual dois objetos podem ser separados e ainda serem
distinguidos como separados. Exemplo: microscópio de resolução de 200nm irá
revelar objetos que estão a 100nm de distância como apenas uma imagem sólida ao
invés de duas.
Montagem de lâminas
para microscopia
Fixação:
Após a coleta da amostra biológica, é necessário preservar as estruturas e
composição desse material, impedindo a ação de bactérias. O processo que
promove essa preservação do material biológico é denominado fixação e pode ser
realizado por diversos métodos: aquecimento, resfriamento (físico), ou pelo uso
de uma substância denominada formol (químico).
Desidratação:
A desidratação é feita através de banhos em álcool em concentrações crescentes.
A graduação nas concentrações permite a desidratação homogênea dos tecidos,
evitando danos na estrutura tecidual. Após a
desidratação é feito o clareamento para substituir o etanol presente.
É
fundamental que a espessura do tecido para análise seja fino/ delgado o
suficiente para a luz do microscópio atravessar a amostra e permitir a
visualização em microscópio de luz. Portanto, em muitos casos, a parafina é
utilizada no processo denominado inclusão a fim de enrijecer o tecido e
permitir um corte em espessura delgada.
Coloração:
Os cortes de tecidos apresentam-se incolores, portanto, colorações específicas
são utilizadas para visualizar e diferenciar as estruturas específicas.
Hematoxilina
com Eosina (HE) é a combinação de coloração mais utilizada. A Hematoxilina cora
em azul ou violeta e a Eosina, em cor-de-rosa.
Aula
prática: Preparação de lâmina
histológica de célula vegetal de cebola
Objetivo: Preparar, corar e observar uma
lâmina histológica de uma célula vegetal de pele de cebola.
Material: Lâmina,
lamínula, pipeta de Pasteur, água destilada, cebola, pinça, microscópio, álcool
etílico, corante azul de metileno, placa de Petri.
Método:
1)
Tirar uma camada da cebola e retirar uma película da cebola;
2)
Depois da retirada da película, colocá-la em uma placa de Petri e adicionar
algumas gotas de corante. Aguardar por 5 minutos;
3)
Colocar o álcool etílico sobre as películas até encobri-las e deixar por 5
minutos;
4)
Colocar a película na lâmina e lavar com álcool duas vezes e, depois, com água
destilada;
5)
Deixar a lâmina secar naturalmente, colocar a lamínula e levar ao microscópio
para a visualização.
Material
de apoio
